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CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务

 

恒一生物科研技术团队已全面推出构建CRISPR/Cas9敲除细胞系服务,并构建了小鼠消化道上皮细胞、小鼠前脂肪细胞、小鼠肝细胞以及猪、奶牛、羊消化道上皮细胞和乳腺上皮细胞等相关基因敲除的细胞系构建。

CRISPR/Cas9简介

CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制,此系统成功被改造为第三代人工核酸内切酶,可对多个基因同时编辑和敲除。基因编辑类型包括基因定点突变、基因移码突变、基因定点整合、多位点突变和小片段的缺失。通过CRISPR/Cas9基因编辑,突变效率高、操作简单和成本低,已经被广大研究者应用于基因编辑的研究。目前 CRISPR/Cas9 技术成功应用于哺乳动物细胞、斑马鱼和小鼠以及细菌的基因组精确修饰,应用最多的领域是基因敲除株系构建和基因敲除动物的研究。基因编辑技术指能够让科研工作者对自己感兴趣的基因进行“编辑”,实现对特定DNA片段的敲除、加入等。自CRISPR/Cas9技术自问世以来,就有着其它基因编辑技术无可比拟的优势,技术不断改进后,更被认为能够在活细胞中最有效、最便捷地“编辑”任何基因。如果想想研究某个基因的功能,可以对这个基因上设计多个gRNA,通过载体表达相应的序列并结合基因组DNA,从而使Cas酶进行有效切割,断裂的基因组序列通过非同源末端连接来修复,然而在修复的的过程中往往会产生DNA序列的插入或删除,造成移码突变,通过终止密码子来终止基因表达,从而实现基因敲除。 

构建CRISPR/Cas9敲除细胞系案例分析

服务说明:

 

服务项目

服务周期(工作日)

备注

细胞基因组提取

1

 

PCR扩增靶点附近目的基因和测序

7-10

 

 靶基因敲除载体构建

10-14

 

混合细胞靶基因敲除测序验证

5-7

 

阳性克隆筛选和验证

21-30

 

Western blot(额外服务)

7-14

 

 

 

 

构建CRISPR/Cas9敲除细胞系服务流程

客户提供:

目标细胞和敲除目的基因

服务流程:

订单接收-签定合同-基因敲除活性检测-质控-发货。

如何订购:

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